行業(yè)應(yīng)用
前一階段花費(fèi)了不少時(shí)間,來(lái)摸索體外BBB的構(gòu)建方法,試了三種Transwell板,試用了2-3臺(tái)細(xì)胞電阻儀,也換了不同課題組的細(xì)胞,功夫不負(fù)有心人,終于構(gòu)建成功拿到了理想結(jié)果。 當(dāng)初在摸索階段從小紅書(shū)上也獲得很多靈感,也感激給予幫助不吝賜教的朋友們,因此借總結(jié)一些經(jīng)驗(yàn),分享出來(lái),希望友友們少走彎路。
1、細(xì)胞狀態(tài)很重要!一定要等到細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)再種板,上室小孔膜上鋪5W個(gè)細(xì)胞,種板要均勻,上室100-200μL完培,下室600-800μL完培。
2、不要污染!由于種Transwell板比較復(fù)雜,工序多,要時(shí)刻注意消毒。種完板后,不用一直鏡下觀察;使用電阻儀檢測(cè)室,更要注意不要污染。
3、 選擇合適的Transwell板,確定自己需要多少孔的孔板,從而知道種多少個(gè)細(xì)胞。如果需要鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)的話,要用PET膜(透明的)。我當(dāng)初試了甄選/康寧/潔特的,最后選了潔特的孔板。
4、選擇穩(wěn)定好用的細(xì)胞電阻儀?。?!這個(gè)是重中之重,比如密理博的電阻儀,是筷子電極,手持式的話容易抖,導(dǎo)致數(shù)值不穩(wěn)。我選的是北京金工的RE1600上皮電壓電阻儀,可以平穩(wěn)放在孔板上,檢測(cè)的時(shí)候數(shù)值超級(jí)穩(wěn)定。
5、關(guān)于BBB形成時(shí)間,每次構(gòu)建BBB的時(shí)長(zhǎng)都要根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)而異,要確保單層細(xì)胞形成(細(xì)胞電阻達(dá)到穩(wěn)定平臺(tái)期),再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
文章引用出處:體外血腦屏障模型構(gòu)建-大功已成 - 小紅書(shū) (xiaohongshu.com)
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